荧光定量PCR的基础原理
荧光定量PCR的基础原理

荧光定量PCR是指在传统PCR反应体系中加入荧光基团，其荧光基团会与PCR每次循环产生的新链的量成同比例增长，再利用检测荧光信号的积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。荧光探针如：TaqMan荧光探针，荧光染料如：SYBR荧光染料。
在荧光定量PCR检测中经常出现的一些定义值的含义：
Ct值：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。
荧光域值：PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺省设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。
Ct值与起始模板的关系：每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代Ct值。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。 http://www.shinegene.org.cn
荧光定量PCR